БЛОГ

Микробиологические тесты пародонтальных заболеваний

В 1990-х годах появилось множество диагностических тестов, основанных на физических, химических, микробиологических и иммунологических методологиях.

Evalusite — это набор, в котором используется новый мембранный иммуноферментный анализ для обнаружения трех предполагаемых периодонтопатогенов: Aa, Pg и Pi. Субгингвальный образец собирают с использованием бумажных точек и добавляют в пробирку для проб. Затем к набору добавляют элюент, в котором используется ELISA сэндвич-типа (иммуноферментный анализ с ферментным связыванием); розовое пятно отображается, если исследуемый организм присутствует. Основные недостатки этого набора тестов заключаются в: 1) предположении, что три обнаруженных организма вызывают заболевание; (2) это многоступенчатый тест; (3) он имеет субъективную калориметрическую конечную точку и (4) нет постоянной записи результатов.

Perioscan представляет собой набор диагностических тестов, в котором используется реакция BANA (N-бензоил-DL-аргинин-2-нафтиламид) -гидролиза, разработанная для обнаружения бактериальных трипсиноподобных протеаз в зубной бляшке. Трипсиноподобная активность была идентифицирована в штаммах P. gingivalis, T. denticola, T. forsythia и некоторых штаммах Capnocytophagia. BANA представляет собой пример конъюгированного с субстратом бета-nepthylamine (p-NA), который гидролизуется этим трипсин-подобным ферментом для высвобождения свободного p-NA. Последний является хромофором и реагирует с различными красителями (например, Fast-Garnet GBC) для получения цветных продуктов.

Поддесневую бляшку собирают и помещают на полосу, содержащую BANA, которая затем складывают для контакта со второй полосой, содержащей реагент красителя «Fast-Black». Сложенную карточку помещают в духовку в течение 15 минут при 55 ° C, и любой сине-черный цвет, который появляется, положителен для вышеуказанных видов. Основным недостатком этого метода является то, что он опирается на выборку бляшек и предполагает, что тестируемые организмы, идентифицированные как присутствующие, означают активное заболевание. Это, как известно, не относится ко всем пациентам и участкам. Кроме того, результаты являются качественными и полагаются на оценку оператора калориметрической конечной точки.

Одна из потенциальных трудностей этого теста заключается в том, что он может быть положительным в клинически здоровых местах и ​​может оставаться таким после лечения.

Проблема со всеми микробиологическими тестами заключается в том, что вполне вероятно, что ряд взаимодействующих бактерий способен вызвать заболевание, комбинация может различаться между индивидами, а тесты, направленные на отдельные виды, могут быть слишком специфичными и могут не учитывать разные типы клона.

Биохимические наборы для испытаний

Биохимические испытательные наборы, используемые в пародонтологии, анализируют крестовидную жидкость десны (GCF). Поскольку эта жидкость получена из тканей пародонта, оценивая ее составляющие, такие как ферменты, медиаторы воспаления и компоненты внеклеточного матрикса могут обеспечить ранние признаки изменений.

Perio 2000

Различные патогенные микроорганизмы, такие как P. gingivalis, P. intermedia и T. forsythia, продуцируют сульфаты, что приводит к значительным уровням летучих сульфидных соединений (VSC) путем деградации белков сыворотки: цистеина и метионина. Поскольку эти VSC могут непосредственно деградировать периодонтальные структуры, усугубляющие периодонтит, их оценка может указывать на поддесневую микробную нагрузку. Система Perio 2000 предназначена для отображения уровня сульфидов в цифровом виде на каждом участке. Короче говоря, наконечник зонда должен быть гидратирован с использованием стерильного промывочного раствора, предоставленного изготовителем, после чего вводится. После положительного считывания наконечник промывают и повторно вставляют в другое поддесневое место.

Prognos-Stik

Этот набор тестов был выпущен в 1993 году. Он обнаруживает повышенные уровни ММР в рыхлительной жидкости десны, такие как эластазы. GCF собирают на полосу фильтровальной бумаги, пропитанную известным количеством забуференной эластазной подложки, помеченной флуоресцентным индикатором. Эластаза на тест-полоске расщепляет субстрат во время реакции 4-6 минут и высвобождает индикатор, видимый под флуоресцентным светом. Эластаза выделяется из лизосом полиморфноядерных лейкоцитов, которые накапливаются на участках воспаления десны. Присутствие повышенных уровней эластазы в GCF может, таким образом, указывать на активные участки заболевания. Хотя сообщалось о взаимосвязи между уровнями эластазы в GCF и активности периодонтальной болезни, эта позиция еще далека от ясности. Дальнейшие клинические испытания необходимы, прежде чем можно будет оценить ценность этого набора тестов в клинической практике.

PerioCheck

Periocheck измеряет активность нейтральной протеазы в GCF. Пробоотборную полоску GCF помещают на гель, содержащий нерастворимые меченые красителем коллагеновые фибриллы (ремазобриллирующий порошок из синего коллагена) и инкубируют. В присутствии нейтральных протеаз (которые диффундируют из полосы в гель) нерастворимый комплекс коллагенового красителя переваривается для выделения растворимых окрашенных красителем фрагментов, которые диффундируют обратно в полоску, превращая ее в синий цвет. Снова тест является только качественным и неспецифичным для PMNL-коллагеназы, которая считается доминирующей коллагеназой на активных участках. Действительно, высокая доля фермента, вероятно, будет бактериальной по происхождению. Кроме того, межпроксимальные участки нельзя отбирать из-за риска загрязнения слюны, и это, безусловно, является основным недостатком этого метода.

PerioGard

PerioGard основан на обнаружении фермента, называемого аспартатаминотрансферазой (АСТ). AST является растворимым внутриклеточным цитоплазматическим ферментом, который высвобождается из клетки после его смерти. Поскольку гибель клеток является важной частью патогенеза периодонта, уровни АСТ в GCF обладают большим потенциалом в качестве маркеров раннего разрушения тканей пародонта. Повышенные общие уровни АСТ в 30-секундном образце были положительно связаны с активными болезнями в отличие от неактивных. Этот коммерческий тест состоит из лотка с двумя тестовыми лунками для каждого зуба и соответствующего реагента для проведения теста. Испытание включает сбор GCF с полоской фильтровальной бумаги, которую затем помещают в буфер гидрохлорида трометамина. К образцу добавляют субстратную реакционную смесь, содержащую 1-аспарагиновую и α-кетоглютериновую кислоту, и дают возможность реагировать в течение десяти минут. В присутствии АСТ аспартат и α-кетоглютериновая кислота катализируются с оксалоацетатом и глутаматом. На практике анализ PerioGard страдает от плохой дифференциации между цветами и является относительно сложной процедурой, включающей несколько этапов.

Тест на генетическую восприимчивость PST®

Тест на восприимчивость к периодонтам (PST®) является первым и единственным генетическим тестом, который анализирует два гена интерлейкинов (IL-1α и IL-1β) для вариаций. IL-1 генетическая восприимчивость не может инициировать или вызывать заболевание, а скорее может привести к более раннему или более тяжелому заболеванию. Генетический тест IL-1 может использоваться для дифференциации некоторых генотипов IL-1, связанных с различными воспалительными реакциями, для выявления лиц, подверженных риску тяжелого заболевания пародонта, даже до 60 лет.

В пародонтологии успех любого лечения зависит от точности первоначального диагноза. В настоящее время большинством случаев хронического периодонтита можно адекватно управлять с использованием существующей диагностической методологии, хотя, очевидно, желательно иметь возможность диагностировать «активное заболевание» по мере его возникновения, а не через несколько месяцев.